L’électrophorèse est une technique analytique largement utilisée pour la détermination de la pureté et l’identification des protéines thérapeutiques. Cette technique repose sur la migration des protéines sous l’effet d’un champ électrique, en fonction de leur mobilité électrophorétique. Selon le type d’électrophorèse, différents attributs de qualité de la protéine peuvent être mesurés. La sensibilité, la robustesse et le débit dépendent du format utilisé ; les formats classiques à gel plat/vertical sont progressivement remplacés par les formats capillaires plus récents, en raison de leurs avantages intrinsèques. Les analyses électrophorétiques, sous différents types et formats, sont actuellement incluses comme méthode de contrôle dans les certificats d’analyse pour les tests par lots de protéines thérapeutiques.
De nombreuses protéines telles que les cytokines, les facteurs sanguins, les hormones, les anticorps monoclonaux (mAbs) et les protéines de fusion sont testées à l’aide de différentes techniques d’électrophorèse comme outil pour identifier et tester leur intégrité.
Selon les principes appliqués à la technique, on peut distinguer plusieurs types d’électrophorèse :
- SDS-PAGE ( électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de dodécylsulfate de sodium ) : elle est réalisée sous forme de gel plat ou vertical et permet de séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaire.
- PAGE ( électrophorèse sur gel de polyacrylamide ) : elle est réalisée sous forme de gel plat ou vertical et permet de séparer les protéines en fonction de leurs charges.
- IEF ( focalisation isoélectrique ) : elle est réalisée sur gel plat ou vertical et permet de séparer les protéines en fonction de leurs points isoélectriques.
- L’ électrophorèse capillaire en présence de dodécylsulfate de sodium (CE-SDS) est réalisée par électrophorèse capillaire et permet de séparer les protéines en fonction de leur masse moléculaire. Cette technique présente une sensibilité, un débit et une reproductibilité supérieurs à ceux de l’électrophorèse SDS-PAGE classique.
- L’ électrophorèse capillaire de zone (CZE) est réalisée grâce à la technologie d’électrophorèse capillaire et permet de séparer les protéines en fonction de leur mobilité électrophorétique. Cette technique présente une sensibilité, un débit et une reproductibilité supérieurs à l’électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PAGE) classique. De plus, elle possède un large éventail d’applications, l’analyse des glycanes étant l’une des principales applications dans la caractérisation des anticorps monoclonaux (AcM).
- cIEF ( focalisation isoélectrique capillaire ) : cette technique utilise l’électrophorèse capillaire et permet de séparer les protéines selon leur point isoélectrique. Elle offre une meilleure sensibilité, un débit plus élevé et une meilleure reproductibilité que l’IEF classique.
- icIEF ( imagerie par focalisation isoélectrique capillaire ) : cette technique utilise l’électrophorèse capillaire et permet de séparer les protéines selon leur point isoélectrique. Similaire à la cIEF , elle offre cependant un meilleur débit.
Toutes ces techniques électrophorétiques sont disponibles chez Kymos grâce à différents instruments et sont actuellement appliquées au contrôle qualité des protéines thérapeutiques innovantes et biosimilaires :
- Chambres d’électrophorèse et alimentations électriques de différentes tailles et de différents fabricants (Bio-Rad, etc.) pour l’électrophorèse classique
- Systèmes d’électrophorèse Multiphor II de GE Healthcare Life Sciences pour l’électrophorèse à plat
- densitomètre calibré GS-900 de Bio-Rad pour convertir les gels d’électrophorèse en images numériques et traiter les données avec le logiciel approprié.
- Systèmes d’électrophorèse capillaire Beckman/Sciex PA800 pour CE.SDS, CZE et cIEF.
- iCE3 de Protein Simple pour icIEF.
