Vergleich von ICH M10 mit früheren Leitlinien der EMA und FDA zur Validierung bioanalytischer Methoden

Obwohl die ICH seit mehr als 25 Jahren Empfehlungen für die Validierung analytischer Methoden zur Bewertung der Qualität von Arzneimitteln und Wirkstoffen (ICH Q2) veröffentlicht, wurde erst kürzlich (2022-2023) eine harmonisierte Leitlinie erstellt, die die Validierung und Analyse von Arzneimitteln und Analyten in biologischen Matrices umfasst.

Diese Matrices weisen, anders als die in Arzneimitteln oder Fertigprodukten vorkommenden, eine sehr hohe Komplexität und eine außergewöhnliche individuelle bzw. interindividuelle Variabilität auf. Aus diesem Grund ist ICH M10 ein sehr wichtiger Harmonisierungsversuch, der bereits von der FDA und der EMA übernommen und umgesetzt wurde und dessen Implementierung durch andere Zulassungsbehörden und -organisationen derzeit läuft.

Unter Berücksichtigung dessen haben unsere bioanalytischen Abteilungen in Zusammenarbeit mit unserer Qualitätssicherungseinheit die wichtigsten Punkte und Unterschiede zu den alten Richtlinien zusammengefasst und synthetisiert, die sich am stärksten auf bioanalytische Studien auswirken.

Einleitung und Anwendungsbereich

ICH M10 beschreibt die Validierung bioanalytischer Methoden, die regulatorische Entscheidungen unterstützen soll, und definiert damit einen spezifischen Anwendungsbereich dieser Leitlinien. Diese Studien sind:

• Nichtklinische toxikokinetische (TK) Studien und pharmakokinetische (PK) Studien, die als Subrogat für klinische Studien durchgeführt wurden
• Alle Phasen klinischer Studien im Rahmen von Zulassungsanträgen (einschließlich vergleichender Bioverfügbarkeits-/Bioäquivalenzstudien (BA/BE)).
• Im Allgemeinen unterliegen Studien den GLP- oder GCP-Richtlinien.

Biomarker werden nur dann berücksichtigt, wenn sie der primäre Endpunkt der Studie sind. Zu den biologischen Matrices gehören Blut, Serum, Plasma und andere Körperflüssigkeiten oder Gewebe.

Allgemeine Grundsätze

Methodenentwicklung

Hinsichtlich der Methodenentwicklung orientiert sich die neue ICH M10 weitgehend an den früheren FDA-Richtlinien. Die Methodenentwicklung sollte das Design, die Betriebsbedingungen, die Grenzen und die Eignung der Methode für ihren vorgesehenen Zweck definieren und sicherstellen, dass sie für die Validierung bereit ist.

Vollständige Validierung

ICH M10 erweitert die bisherigen Leitlinien der EMA und FDA hinsichtlich der Frage, wann eine vollständige Validierung einer bioanalytischen Methode erforderlich ist .

Chromatographie-Analysen

Validierung

Die ICH M10 enthält zusätzliche Details und Richtlinien für jedes Element der Methodenvalidierung von Chromatographie-Assays und erweitert einige davon bzw. fügt sogar neue Kapitel hinzu. Unser Team hat die wichtigsten Punkte und Unterschiede zu früheren EMA/FDA-Richtlinien zusammengefasst:

• Selektivität und Spezifität wurden in der neuen ICH M10-Richtlinie getrennt.
• Matrixeffekt (ME): In Bezug auf den Matrixeffekt bietet die ICH M10 präzisere Vorgaben als frühere EMA- und FDA-Richtlinien und empfiehlt die Bestimmung von Richtigkeit und Präzision für jede einzelne Matrixquelle/Charge.
• Bezüglich A&P erweitert ICH M10 die Grundlage der EMA und FDA und kombiniert einige ihrer Empfehlungen. Die wichtigste Empfehlung: Die Kalibrierkurven für diese Bewertungen sollten in mindestens einem Durchlauf mit frisch dotierten Kalibrierstandards erstellt werden. Werden in den weiteren Durchläufen keine frisch dotierten Kalibrierstandards verwendet, muss die Stabilität der gefrorenen Kalibrierstandards nachgewiesen werden.
• Stabilität: ICH M10 geht noch weiter auf die früheren Richtlinien der EMA/FDA ein und gibt Empfehlungen zur Stabilität des Analyten in biologischen Matrices, in verarbeiteten Proben sowie in Stamm- und Arbeitslösungen an.

Analyse der Studienstichprobe

Die ICH-Richtlinie M10 legt fest, dass die Analyse der Studienproben nach Abschluss der Validierung erfolgen kann (zu diesem Zeitpunkt sind die Daten bei einer Zulassungsbehörde eingereicht). Es ist jedoch vorgesehen, dass einige Parameter auch erst später festgelegt werden können. Die ICH-Richtlinie M10 bleibt hinsichtlich der Parameter und Verfahren weitgehend unverändert, mit geringfügigen Änderungen und einigen wenigen Ergänzungen.

Ligandenbindungsassays

Wichtige Reagenzien

Unser Team hat die wichtigsten Punkte und Unterschiede zu den früheren EMA/FDA-Richtlinien bezüglich wichtiger Reagenzien für Ligandenbindungsassays zusammengefasst:

• Referenzstandard: Wie bei EMA/FDA schreibt ICH M10 keine Primärstandards vor. Es gelten dieselben Informationen und Empfehlungen wie in früheren Leitlinien bezüglich Analysezertifikaten (CoA) und Ablaufdatum von Referenzstandards, Verwendung derselben Charge für die Kalibrierkurve und Chargenwechsel.
• Kritische Reagenzien: Die Empfehlungen basieren auf EMA/FDA, jedoch ist zu beachten, dass die Stabilitätsprüfung dieser kritischen Reagenzien auf der Leistung im bioanalytischen Test und auf allgemeinen Richtlinien für die Lagerungsbedingungen der Reagenzien basieren sollte und über das Verfallsdatum des Lieferanten hinaus verlängert werden kann.

Validierung

• Spezifität: ICH M10 behält die gleichen Empfehlungen wie EMA/FDA hinsichtlich des Verfahrens und der Akzeptanzkriterien für Spezifität bei, weist aber darauf hin, dass im Falle einer Kreuzreaktivität die Auswirkungen bewertet werden müssen.
• Selektivität: ICH M10 besagt, dass die Matrix unspezifische Matrixkomponenten enthalten kann, die die Bestimmung des interessierenden Analyten beeinflussen können. Zu den erweiterten Empfehlungen aus der Vergangenheit gehören die Selektivität im unteren Messbereich, die Verwendung von Spike-Konzentrationen und die Mindestanzahl an Patienten in relevanten Populationen. Die Akzeptanzkriterien bleiben unverändert.
• Kalibrierkurve und Messbereich: Hinsichtlich Kalibrierkurve und Messbereich bleibt ICH M10 im Wesentlichen unverändert gegenüber früheren Richtlinien. Es wird jedoch auch darauf hingewiesen, dass die Kalibrierkurve vorzugsweise mit frisch dotierten Kalibrierstandards erstellt werden sollte. Die Akzeptanzkriterien bleiben gleich, abgesehen von einigen geringfügig erweiterten Punkten.
• Genauigkeit und Präzision: Der Hauptunterschied dieser Parameter besteht darin, dass ICH M10 empfiehlt, die Qualitätskontrollproben (QCs) durch Zugabe von Matrixsubstanzen herzustellen und unter den für die Studienproben vorgesehenen Bedingungen zu lagern. Außerdem wird eine neue Konzentrationsstufe für die QC-Herstellung eingeführt (Mittelwert, um den geometrischen Mittelwert), und es wird empfohlen, Genauigkeit und Präzision anhand derselben Messreihen und Daten zu bewerten. Die Akzeptanzkriterien basieren auf den Vorgaben der EMA und FDA.

• Linearität der Verdünnung und Hook-Effekt: Die Empfehlungen entsprechen denen der EMA/FDA (Harmonisierung beider Richtlinien), mit geringfügigen Ergänzungen. Bezüglich der Akzeptanzkriterien empfiehlt ICH M10, dass die bei der Analyse der Studienproben verwendeten Verdünnungsfaktoren innerhalb des Bereichs der während der Validierung ermittelten Verdünnungsfaktoren liegen sollten.
• Stabilität: Gemäß ICH M10 muss die Stabilitätsprüfung die Verarbeitungs- und Lagerbedingungen umfassen, und die Stabilitätsproben müssen den gesamten Konzentrationsbereich der Prüfpräparate abdecken. Für Biologika sieht die neue Leitlinie zusätzlich vor, dass ein Bracketing-Verfahren (zwischen zwei Temperaturen) zulässig ist; die Empfehlungen hinsichtlich Verfahren und Akzeptanzkriterien sind harmonisiert.

Analyse der Studienstichprobe

• Analytischer Lauf : Die Zusammensetzung des Laufs und die Platzierung der QCs im Lauf entsprechen den EMA/FDA-Vorgaben. Bei der Analyse von mehr als einer Platte sollte jede Platte einen eigenen Satz von Kalibrierstandards und QCs enthalten.

Ein wichtiger Punkt in ICH M10 ist, dass die Qualitätskontrollproben den erwarteten Konzentrationsbereich der Studienproben abdecken sollten. Es wird außerdem darauf hingewiesen, dass Einzelwell-Analysen zulässig sind (sowohl für Validierungs- als auch für Studienproben).

Hinsichtlich der Kalibrierkurve und der Akzeptanzkriterien stellt ICH M10 eine Harmonisierung der Richtlinien von EMA und FDA dar. Die mittlere Richtigkeit und Präzision der Qualitätskontrollen aller akzeptierten Läufe sollte auf jeder Konzentrationsstufe berechnet und im Analysebericht angegeben werden.

• Reanalyse von Studienproben : Hinsichtlich der Gründe, Kriterien und der Anzahl der Proben für die Reanalyse gelten dieselben Empfehlungen wie bei EMA/FDA. Gemäß ICH M10 soll die Analyse der Proben auf der gleichen Anzahl von Vertiefungen pro Studienprobe basieren wie die Erstanalyse.

Wiederanalyse von Proben aufgrund von Komplikationen (ISR)

Gemäß ICH M10 dient die ISR der Überprüfung der Zuverlässigkeit der gemessenen Analytenkonzentrationen in den Proben und sollte in den von EMA und FDA spezifizierten und in der neuen Leitlinie zusammengeführten und harmonisierten Situationen durchgeführt werden. Die Studien, die Anzahl der Studien, die Probenauswahl und die Berechnung bleiben unverändert.

Schlussfolgerungen

Wie aus diesem zusammenfassenden Text hervorgeht, stellt ICH M10 einen harmonisierten Rahmen für bioanalytische Studien dar, der bereits von der FDA und der EMA umgesetzt wird und sich zum Standard bei der Analyse von Arzneimitteln und Analyten in biologischen Matrices entwickelt hat.

Seit unserer Anpassung an diese neue Richtlinie haben wir von unseren Kunden sehr positives Feedback zu dieser neuen Version der Validierungsprotokolle und Probenanalyseprotokolle erhalten, was die Konformität unserer Methoden und Verfahren mit ICH M10 bestätigt.

Benötigen Sie weitere Informationen zu dieser neuen Richtlinie oder Unterstützung bei Ihren Projekten? Dann kontaktieren Sie uns bitte unter quotes@kymos.com . Wir beraten und unterstützen Sie gerne ausführlich.